TJ-CEO
2009 , Vol 4 , Num 2
Alfa Tokoferol ve Diğer Güncel Antifibrotiklerin, Tek ve Kombine Kullanımda İnsan Endotel Hücreleri Üzerine Apoptotik Etkilerinin İn Vitro İncelenmesi
1Bağcılar E.A. Hastanesi, Göz Kliniği, İstanbul, Uzm. Dr.2İ.Ü, İstanbul Tıp Fakültesi, Fizyoloji A.D., İstanbul, Prof. Dr.
3İ.Ü, Fen Fakültesi, Biyoloji Bölümü, İstanbul, Uzm. Dr.
4İ.Ü., İstanbul Tıp Fakültesi, Fizyoloji A.D., İstanbul, Asist. Dr.
5İ.Ü., Fen Fakültesi, Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü, İstanbul, Uzm. Dr.
6İ.Ü., Fen Fakültesi, Biyoloji Bölümü, İstanbul, Asist. Dr.
7İ.Ü., Fen Fakültesi, Biyoloji Bölümü, İstanbul, Doç. Dr. Amaç: Glokom cerrahisinde, fibroselüler skar formasyonunu önlemek için kullanılan güncel drogların endotel üzerine yan etkileri kullanımlarını sınırlamaktadır. α-tokoferolün ise, -doğal bir antioksidan olmanın ötesinde, tenon fibroblast proliferasyonunu ve fibroselüler skar formasyonunu engelleyen, diğer antifibrotiklerin kullandığı yolaklara etkili bir nöromedyatör olduğu bilinmektedir. Bu çalışmada, α-tokoferol ve diğer antifibrotiklerin insan endotel hücreleri üzerine in vivo kullanıma uygun dozlardaki apoptotik etkileri farklı kombinasyon ve sürelerde in vitro incelendi.
Gereç ve Yöntemler: ECV304 İnsan ulimbikal ven endotelyal hücre kültürlerinde antifibrotik ajanların etkileri; 5 dakikalık tek uygulama, ve 10 gün boyunca α-tokoferol ilavesiyle kombine olarak incelendi. Antifibrotik ajan olarak paklitaksel, mitomisin, 5-FU ve α-tokoferol kullanıldı. DAPI boyama ile floresans mikroskopunda apoptotik indeks tayin edildi. İmmunohistokimyasal yöntem ile hücrelerin kaspaz aktivitelerini incelenerek stoplazmik komponent değerlendirildi ve Reverse Transkriptaz-Polymerase Chain Reaction (PCR) tekniği kullanılarak bcl-2 ve bax gen ekspresyonları araştırıldı. Mitotik indeks tayini yapılarak hücrelerin proliferasyon eğilimleri belirlendi.
Bulgular: Kısa ve uzun dönem apoptotik indeks değerleri mitomisin ve özellikle paklitakselde anlamlı yüksek bulundu. Mitomisinin etkisinin uzun dönemde tokoferol ilavesi ile anlamlı derecede arttığı gözlendi. Bcl-2/Bax oranınlarında artış ve kaspaz 3 aktivitesi de sadece mitomisin grubunda görüldü. Uzun dönem örneklerinde ise kaspaz 3 aktivitesi mitomisine ek olarak paklitaksel grubunda da görüldü. Kısa dönem mitotik indeks sonuçlarında α-tokoferol, uzun dönemde ise paklitaxel+Tokoferol guruplarında anlamlı artış bulundu.
Sonuç: α-tokoferol’ün kombine kullanımı antifibrotiklerin endotel hücrelerindeki apoptotik etkilerini azaltmamıştır. Özellikle paklitaksel ve mitomisin ile olan additif etkisi incelenebilir. α-tokoferol’ün ve 5-FU’in tek başına ve kombine uzun ve kısa süreli etkileri kontrol grubuna yakın olduğundan, kullanımları endotel toksisitesi açısından daha güvenlidir. Keywords : Alfa-tokoferol, mitomisin, 5-FU, antifibrotik, apoptozis